24-well plate:
| 1 A1 Tre:BACE2+FRET Substrate 2 0 Dox | 2 A2 Tre:miRG1,Hef1a:BACE1 (0 Dox) +FRET Substrate 1 | 3 A3 Tre:miRG1,Hef1a:BACE1 (1000 Dox) +FRET Substrate 1 | 4 A4 Tre:BACE2+FRET Substrate 2 1000 Dox | 5 A5 Assay Buffer 1 + FRET Substrate 1 | 6 A6 Assay Buffer 2 + FRET Substrate 2 | 7 A7 Purified BACE1 + FRET Substrate 1 |
| 13 B1 5 uM Reference Standard+ FRET 1 | 14 B2 2.5 uM Reference Standard+ FRET 1 | 15 B3 1.25 uM Reference Standard+ FRET 1 | 16 B4 0.63 uM Reference Standard+ FRET 1 | 17 B5 0.32 uM Reference Standard+ FRET 1 | 18 B6 0.16 uM Reference Standard+ FRET 1 | |
| 19 C1 5 uM Reference Standard+ FRET 2 | 20 C2 2.5 uM Reference Standard+ FRET 2 | 21 C3 1.25 uM Reference Standard+ FRET 2 | 22 C4 0.63 uM Reference Standard+ FRET 2 | 23 C5 0.32 uM Reference Standard+ FRET 2 | 24 C6 0.16 uM Reference Standard+ FRET 2 |
...
purified BACE1 (1F) : Assay buffer (1D) 1:250
50 uL total: 0.2 1 uL 1F : 49.8 249 uL
Prepare substrates:
for BACE2 - component 2A:2C in 1:100 ratio
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