Versions Compared

Old Version 27

changes.mady.by.user Unknown User (clrichar@mit.edu)

Saved on

compared with

New Version Current

changes.mady.by.user Unknown User (clrichar@mit.edu)

Saved on

Key

  • This line was added.
  • This line was removed.
  • Formatting was changed.
Comment: Migration of unmigrated content due to installation of a new plugin

Progress

CloningTransfectionInductionCytometryData Analysis
     

 

 

Background 

The BCR setup that we used in iGEM (CD79X-TCS-Gal4VP16 and Syk-15-TEVp) resulted in an inverted signal i.e. lower output when the BCR was activated with antiIgM than when unactivated. We expect that this inverted signal was a result of how fusing proteins to TEVp and TCS affected the sterics of their interaction. We think that when Syk was recruited to the activated BCR, it was no longer able to access the TCS, resulting in lower signal than background. This experiment aims to optimize the relative positions of the system's components by finding the optimal fusion protein linker lengths. We want to find the optimal length of the CD79-XnTCSXc-Gal4VP16 linker (where Xn and Xc are the number of amino acids of the n terminal and c terminal side of the TCS, respectively) and the Syk-TEVp linker. Optimizing 3 factors simultaneously gives a 3D search space as shown below. We chose data points in a way that maximized the space explored in the least number of points. 

Image Modified

Image Modified

Approach

For ease of screening to identify correct linker constructs, we want to clone Protein1-pTet:mRFP-Protein2

...

 constructs. 

Parts

Part
h:CA-pT:RFP-G4h:CA-pT:RFP-G4TRE:Syk-pT:RFP-G4
Status
 Need SDM to correct BsaI site in Gal4 
Part
hEF1a:HeavyhEF1a:LightUAS:mKate
Status
   

hEF1a:CD79A-XnTCSXc-Gal4VP16

3TCS3 9TCS3 15TCS3
     
 6TCS69TCS612TCS6 
     
3TCS96TCS99TCS912TCS915TCS9
     
 6TCS129TCS1212TCS12 
     
3TCS15 9TCS15 15TCS15
     


TRE:Syk-X-tTEVp

36 912 15
     

 

 

Procedure

Controls

UntransfectedSingle Color BlueSingle Color RedDouble Color

-VE control (background activation)

-VE control (background cleavage)+VE control
HEK293

HEK293

hEF1a:rtTA

hEF1a:MabH

hEF1a:MabL

hEF1a:Lyn

hEF1a:eBFP

 

hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16

hEF1a:CD79B

TRE:Syk-15-tTEVp



Dox x uM

HEK293

hEF1a:rtTA

hEF1a:MabH 

hEF1a:MabL 

hEF1a:Lyn 

 

hEF1a:mKate 

hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16 

hEF1a:CD79B 

TRE:Syk-15-tTEVp 





Dox x uM

HEK293

hEF1a:rtTA 

hEF1a:MabH 

hEF1a:MabL

hEF1a:Lyn

hEF1a:eBFP

 hEF1a:mKate

hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16

hEF1a:CD79B

TRE:Syk-15-tTEVp





Dox x uM

HEK293

hEF1a:rtTA

hEF1a:MabH

hEF1a:MabL

hEF1a:Lyn

hEF1a:eBFP

UAS:mKate

hEF1a:CD79A


hEF1a:CD79B

TRE:Syk-15-tTEVp



Dox x uM

HEK293

hEF1a:rtTA

hEF1a:MabH

hEF1a:MabL

hEF1a:Lyn

hEF1a:eBFP

UAS:mKate

hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16

 

hEF1a:CD79B

TRE:Syk



Dox x uM

HEK293

hEF1a:rtTA

hEF1a:MabH

hEF1a:MabL

hEF1a:Lyn

hEF1a:eBFP

UAS:mKate

hEF1a:CD79A

 

hEF1a:CD79B

TRE:Syk-15-tTEVp

hEF1a:GAl4VP16


Dox x uM


* Maximum linker lengths were used in controls to evaluate the maximum background activation (CD79A-15TCS15-Gal4VP16) and maximum background cleavage (Syk-15-tTEVp)


Experimental Conditions 

- anti IgM

+ anti IgM

HEK293

hEF1a:rtTA

hEF1a:MabH

hEF1a:MabL

hEF1a:Lyn

hEF1a:eBFP

UAS:mKate

hEF1a:CD79A-XnTCSXc-Gal4VP16

hEF1a:CD79B

TRE:Syk-Xs-tTEVp

 

dox x uM

HEK293

hEF1a:rtTA

hEF1a:MabH

hEF1a:MabL

hEF1a:Lyn

hEF1a:eBFP

UAS:mKate

hEF1a:CD79A-XnTCSXc-Gal4VP16

hEF1a:CD79B

TRE:Syk-Xs-tTEVp


dox x uM

anti IgM x uM

XsXnTCSXc
S33tcs3, 3tcs15, 9tcs9, 15tcs3, 15tcs15
S66tcs6, 6tcs12, 9tcs9, 12tcs6, 12tcs12
S93tcs9, 6tcs9, 9tcs3, 9tcs6, 9tcs9, 9tcs12, 9tcs15, 12tcs9, 15tcs9
S126tcs6, 6tcs12, 9tcs9, 12tcs6, 12tcs12
S153tcs3, 3tcs15, 9tcs9, 15tcs3, 15tcs15
Expand
titlePlate map

Plate 1

WELL 1

HEK293

WELL 2

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

 

hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 100ng


Dox 1 nM

WELL 3

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

 

hEF1a:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16 50ng
hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 100ng


Dox 1 nM

WELL 4

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

hEF1a:mKate 50ng

hEF1a:CD79A 50ng
hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL 5

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS15-G4VP16 50ng
hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL 6

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A 50ng
hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL 7

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A 50ng

 

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

hEF1a:GAl4VP16 50ng


Dox 1 nM

     
      

 

     

 

Plate 2

WELL

...

8

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3tcs3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

9

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3tcs3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

Dummy DNA50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

10

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3tcs15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

11

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3tcs15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

Dummy DNA50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

12

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9tcs9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

13

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9tcs9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

Dummy DNA50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

14

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15tcs3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

15

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15tcs3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

Dummy DNA50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

16

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15tcs15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

17

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15tcs15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-3-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM


  

WELL

...

18

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng

 

Dox 1 nM

WELL

...

19

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

20

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng

 

Dox 1 nM

WELL

...

21

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

22

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng

 

Dox 1 nM

WELL

...

23

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

24

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

25

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

Dummy DNA50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

26

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

27

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-6-tTEVp 50ng

Dummy DNA50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

 

 

 

Plate 3

WELL

...

28

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

29

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

30

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

31

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

32

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

33

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

34

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

35

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

36

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

37

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

38

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

39

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

40

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

41

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

42

HEK293 50ng

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

43

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

44

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

45

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-9-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

 

     

 

Plate 4

WELL

...

46

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM


WELL

...

47

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

48

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

49

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-6TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

50

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

51

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

52

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

WELL

...

53

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS6-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

54

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM


WELL

...

55

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-12TCS12-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-12-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

  

WELL

...

56

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3TCS3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM


WELL

...

57

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3TCS3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

58

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3TCS15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM


WELL

...

59

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-3TCS15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

60

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM


WELL

...

61

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-9TCS9-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

62

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM


WELL

...

63

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS3-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

WELL

...

64

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM


WELL

...

65

HEK293

hEF1a:rtTA 50ng

hEF1a:MabH 50ng

hEF1a:MabL 50ng

hEF1a:Lyn 50ng

hEF1a:eBFP 50ng

UAS:mKate 50ng

hEF1a:CD79A-15TCS15-Gal4VP16 50ng

hEF1a:CD79B 50ng

TRE:Syk-15-tTEVp 50ng

Dummy DNA 50ng


Dox 1 nM

anti IgM x uM

  

Results

Discussion

...