...
UAS: mKate is TAL14/UAS: mKate
For anti-IgM activation, used 1ug per well (0.5uL of 2mg/mL stock) to get a final concentration of 2ug/mL. This value was chosen based on a paper where they activated with 10ug antibody/mL (where there were 10^7 B cells per mL). Given that confluent HEK293 tends to be around 10^6 cells/mL (on the low side) and that there's 500uL media in each well, it seemed reasonable to activate with 1ug.
Well 1 | Well 2 | Well 3 | Well 4 | Well 5 | Well 6 |
|---|---|---|---|---|---|
untransfected (calibration) | eBFP bleed throngh control | leaky mKate control |
| TEVp control (nonspecific G4 cleavage) | TEVp control (nonspecific G4 cleavage) |
HEK293
| HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng hEF1a: Lyn 100 ng GmabH 100 ng GmabL 100 ng CD79A 100 ng CD79B 100 ng Dummy
| HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 100 ng GmabH 100 ng GmabL 100 ng CD79A 100 ng CD79B
| HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 100 ng GmabH 100 ng GmabL 100 ng CD79A 100 ng CD79B 100 ng TRE: Gal4-VP16 1000 nM dox
| HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 100 ng GmabH 100 ng GmabL 100 ng CD79A-TCS-G4 100 ng CD79B 100 ng Dummy | HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 100 ng GmabH 100 ng GmabL 100 ng CD79A-TCS-G4 100 ng CD79B 100 ng Dummy Anti-IgM |
| Well 7 | Well 8 | Well 9 | Well 10 | Well 11 | Well 12 |
HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 100 ng GmabH 100 ng GmabL 100 ng CD79A-TCS-G4 100 ng CD79B 0 nM dox
| HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 100 ng GmabH 100 ng GmabL 100 ng CD79A-TCS-G4 100 ng CD79B 0 nM dox Anti-IgM | HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 100 ng GmabH 100 ng GmabL 100 ng CD79A-TCS-G4 100 ng CD79B 1000 nM dox
| HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 100 ng GmabH 100 ng GmabL 100 ng CD79A-TCS-G4 100 ng CD79B 1000 nM dox Anti-IgM | HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 50 ng GmabH 50 ng GmabL 50 ng CD79A-TCS-G4 50 ng CD79B 200 ng Dummy 1 nM dox
| HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 50 ng GmabH 50 ng GmabL 50 ng CD79A-TCS-G4 50 ng CD79B 200 ng Dummy 1 nM dox Anti-IgM |
| Well 13 | Well 14 | Well 15 | Well 16 | Well 17 | Well 18 |
HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 50 ng GmabH 50 ng GmabL 50 ng CD79A-TCS-G4 50 ng CD79B 200 ng Dummy 100 nM dox | HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 50 ng GmabH 50 ng GmabL 50 ng CD79A-TCS-G4 50 ng CD79B 200 ng Dummy 100 nM dox Anti-IgM | HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 25 ng GmabH 25 ng GmabL 25 ng CD79A-TCS-G4 25 ng CD79B 300 ng Dummy 10 nM dox
| HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 25 ng GmabH 25 ng GmabL 25 ng CD79A-TCS-G4 25 ng CD79B 300 ng Dummy 10 nM dox Anti-IgM | HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 12.5 ng GmabH 12.5 ng GmabL 12.5 ng CD79A-TCS-G4 12.5 ng CD79B 350 ng Dummy 1 nM dox | HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 12.5 ng GmabH 12.5 ng GmabL 12.5 ng CD79A-TCS-G4 12.5 ng CD79B 350 ng Dummy 1 nM dox Anti-IgM |
| Well 19 | Well 20 | Well 21 | Well 22 | Well 23 | Well 24 |
HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 12.5 ng GmabH 12.5 ng GmabL 12.5 ng CD79A-TCS-G4 12.5 ng CD79B 350 ng Dummy 100 nM dox
| HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 12.5 ng GmabH 12.5 ng GmabL 12.5 ng CD79A-TCS-G4 12.5 ng CD79B 350 ng Dummy 100 nM dox Anti-IgM
| HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 6.25 ng GmabH 6.25 ng GmabL 6.25 ng CD79A-TCS-G4 6.25 ng CD79B 375 ng Dummy 0 nM dox
| HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 6.25 ng GmabH 6.25 ng GmabL 6.25 ng CD79A-TCS-G4 6.25 ng CD79B 375 ng Dummy 0 nM dox Anti-IgM
| HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 6.25 ng GmabH 6.25 ng GmabL 6.25 ng CD79A-TCS-G4 6.25 ng CD79B 375 ng Dummy 1000 nM dox
| HEK293 100 ng hEF1a: eBFP 100 ng hEF1a: rtTA 100 ng TRE: Syk-TEVp 100 ng UAS: mKate 100 ng hEF1a: Lyn 6.25 ng GmabH 6.25 ng GmabL 6.25 ng CD79A-TCS-G4 6.25 ng CD79B 375 ng Dummy 1000 nM dox Anti-IgM |